Forscher entwickeln neue Technik für die Erkennung von ALK-rearrangements in nicht-kleinzelligem Lungenkrebs

Forscher haben eine neuartige Technik entwickelt für die Erkennung von ALK-rearrangements in nicht-kleinzelligem Lungenkrebs (NSCLCs) , ist empfindlicher und einfacher durchzuführen, als die derzeit verfügbaren Techniken. Die Technik, die helfen können, verbessern Sie die routine für die Diagnose von ALK-Tests auf NSCLCs, die entscheidend für die Identifizierung von Patienten mit fortgeschrittenem nicht-kleinzelligem Lungenkrebs, die am ehesten profitieren von der gezielten Therapie mit einem ALK-inhibitor.

Keiner der drei aktuellen routine-Methoden zum Nachweis von ALK-rearrangements in (NSCLC) ist ohne Nachteile, besonders für die Gewebe-Proben, fixiert in formalin eingebettet in paraffin. Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) ist die einzige zugelassene Technik für ALK-Test, aber es ist nicht immer machbar wegen der hohen Kosten, die erforderliche Zeit für die Prüfung, und die Notwendigkeit für spezielle Ausrüstung und know-how. Interpretation der Immunhistochemie (IHC) Ergebnisse kann schwierig sein, weil der schwache und variable immunoreactivity. Reverse Transkription-polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) ist sehr empfindlich, benötigt aber eine hohe Qualität der RNA, die oft schwierig zu erhalten, und kann nicht erkennen, rearrangements mit unbekannten Partnern.

Die neue Technik, basierend auf quantitativen (q)RT-PCR, überwindet diese Probleme, indem es aufbauend auf die Empfindlichkeit der RT-PCR und darunter zwei Funktionen: eine RNA-Isolierung Methode wurde optimiert, um den reverse-Formaldehyd-änderung und kleinen RT-PCR-amplifikate zu ermöglichen, für die Verwendung von fragmentierten Nukleinsäuren, die für die effiziente Amplifikation des ALK-cDNA. Der Roman qRT-PCR-test misst die expression der 5′ – und 3′ Teile der ALK Abschrift GESONDERT festgestellt unsymmetrisch ALK-Ausdruck ein Hinweis auf eine gen-Umlagerung in 24 (4.6%) 523 interpretierbar NSCLC-Proben und in voller Länge ALK-Transkript-expression in sechs Tumoren (1.1%). Beide FISH und qRT-PCR-Tests wurden durchgeführt auf 182 Tumoren; qRT-PCR-genau getippt, 97% von 19 Tumoren mit ALK-rearrangements und 158 mit Nein rearrangements. Die Ergebnisse der Studie sind veröffentlicht in der März-Ausgabe des Journal of Thoracic Oncology (JTO), der offiziellen Zeitschrift der Internationalen Gesellschaft zum Studium von Lungenkrebs (IASLC).

„Die qRT-PCR-Technik erfasst zuverlässig ALK-rearranged Tumoren unabhängig von der fusion partner und auch Tumoren identifiziert, die mit volle-Länge-Transkript die expression der gene, die nicht nachweisbar durch die FISCHE, sondern die relevant sein können für die ALK-inhibitor-Therapie als gut“, sagt führen Autor Claudia Kalla, PhD, von der Abteilung für Klinische Pathologie, Robert-Bosch-Krankenhaus und theDr. Margarete Fischer-Bosch-Institut für Klinische Pharmakologie, Stuttgart, Deutschland. „Die Technik scheint zu sein, ein sensibler, leicht zu führen, und high-throughput-Methode geeignet für die routinemäßige Diagnose von ALK-Aktivierung nicht nur bei Lungenkrebs, sondern auch in anderen tumor-Entitäten wo rearrangements mit alternative Fusionspartner oder transkriptionelle hochregulation sind weit verbreitet.“

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